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关于非洲猪瘟病毒东欧强毒株的感染试验


现代畜牧网 http://www.brainbulb.net 2019/6/24 13:17:50 关注:276 评论: 我要投稿

  本文译自“猪病会报”No072,2018,由山田 学等发表的“关于非洲猪瘟病毒东欧强毒株的感染试验”。
  目的
  非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)所致,猪和野猪以高热、全身的出血性病变为特征的高致死率、烈性的传染病。
  本病的病态和症状依据病毒毒株的病原性、感染病毒量、宿主的免疫状态,表现出甚急性、急性、亚急性、慢性、不显性等多样性。其中急性、亚急性的非洲猪瘟的临床症状和猪瘟酷似,在OIE的诊断手册也明确强调,在诊断非洲猪瘟时要重点和猪瘟进行鉴别诊断。因此,在确认非洲猪瘟的病态的同时,以探讨应该怀疑本病的诊断指标,与猪瘟的鉴别点为目的,使用东欧强毒株进行非洲猪瘟病毒的感染试验。
  试验1
  材料与方法
  为了确认ASFV东欧流行强毒株Armenia07毒株对猪的病原性,将ASFV Armenia07毒株感染猪的脾脏乳剂10,000倍稀释后(ASFV核酸数:118copies/μL),大腿部肌肉注射给8周龄的小猪10头,每头猪注射1ml。感染后每天早上检测体温,观察临床症状,每天采取血液、鼻汁、唾液和粪便,用RT-PCR检测样品中的病毒含量,并在3、5、6、7日分别剖检5头、3头、1头和1头,观察剖检所见。
  结果
  感染后3日,有5头猪发热,在试验期间10头猪中有8头猪呈现41℃以上的发热,没有发热的2头猪(No.3和No.12)在感染后3日突然死亡(表1)。
  感染后4日开始出现精神沉郁,食欲减退等临床症状,没有出现淤血等现象。感染后3日突然死亡的No.10猪和感染后5日突然死亡的No.9猪表现出鼻出血的症状,No.7猪在感染后7日测定直肠体温后出血。
  感染后3日解剖的4头猪,与对照组比较,脾脏的颜色略呈暗色,没有其它特征性病变。
  感染后5日解剖的5头猪中有4头猪脾脏肿大呈黑色,脾脏变宽、变厚,肝脏周围的淋巴结、肠系膜淋巴结、肾门淋巴结等腹腔内淋巴结呈暗红色,腹水增多呈红色,从胃到大肠的消化道黏膜出血,4头猪中有3头猪扁桃体出血,7日存活猪的病变呈轻度。解剖时血液不易凝固。

  ASFV感染后病毒的检出情况
  由表2可以看出,感染后的2日开始从全血和血清中既可以检测到ASFV核酸,在感染后3日,9头猪中有8头猪的全血样本可以检测到ASFV核酸。从感染后3日开始病毒在鼻汁中被排泄(表3),4日之后在唾液和粪便中可以检测到ASFV核酸(表4、表5)。全血和血清的检出率要明显高于鼻汁、唾液和粪便,因此全血作为核酸的检测样本是最理想的。

 

  试验2
  材料及方法
  为了确认ASFV东欧流行强毒株Armenia07毒株水平传播能力,将ASFV Armenia07毒株感染猪的脾脏乳剂10,000倍稀释后(ASFV核酸数:118copies/μL),大腿部肌肉注射给8周龄的小猪2头,每头猪注射1ml。同时使2头非感染猪与其同居,每天早上检测体温,观察临床症状,每天采取血液、鼻汁、唾液和粪便,用RT-PCR检测样品中的病毒含量,并计划在6和11日分别对感染猪进行剖检,观察剖检所见。
  结果
  感染猪自感染后3日开始呈现40℃以上的发热,感染后5日体温可以达到42℃左右(图1)。
  同居猪自同居后,快者自同居9日,慢者自同居11日开始呈现40℃以上的发热,体温可以高达42℃左右。

  临床症状及剖检所见详见表6
  感染猪自感染后4日开始出现精神沉郁、食欲减退,突然死亡,外观没有出血病变。同居猪自同居后9日出现精神沉郁、食欲减退,没有出现死亡,按试验计划剖检。
  感染猪剖检可见脾脏肿大呈黑色,肾脏和腹腔内淋巴结呈暗红色,腹水增多呈红色,肺水肿,消化道黏膜出血。
  同居猪均呈现脾脏肿大呈黑色,消化道黏膜出血;腹腔内淋巴结和肾脏的暗红色个体间有一定差异;没有观察到肺水肿和腹水增多。

 

  ASFV感染后或者同居后病毒的检出情况
  感染后3日可以从感染猪的全血和血清中(表7和表8),感染4日之后可以从感染猪的鼻汁中(表9)和唾液中(表10)检测到ASFV核酸。
  和感染猪同居的健康猪,快者在同居8日之后,慢者在同居11之后可以从同居猪的全血和血清中(表7和表8)中检测到ASFV核酸,同居感染率达100%,证明可以水平传播。同时证明同居感染猪从鼻汁中(表9)和唾液中(表10)大量散毒,而粪便中(表11)的排毒量很少。
  No.2感染猪感染后4-5日病毒从鼻汁和唾液中被排出,No.5和 No.6同居猪被感染,同居猪在同居9日呈现发热的症状。No.1感染猪感染后5-6日病毒从鼻汁和唾液中被排出,No.3和 No.4同居猪被感染,同居猪在同居10-11日呈现发热的症状。2群之间的差异可能与感染猪排泄的病毒量有关。

 

  结论
  通过本试验的RT-PCR结果来看,在呈现40℃以上的发热之日,既可以从血液中检测到ASFV核酸,血液中ASFV核酸的检出要比鼻汁和唾液的提前1-2日,因此,ASF的早期摘发淘汰用血液材料检测病毒核酸是非常重要的。
  通过本试验,ASFV感染后4-5日猪表现出发热的症状,然后从鼻汁和唾液中病毒被排泄,此时同居猪被感染,4-5后发病,从感染猪到下一个猪表现出临床症状需要10日左右,因此ASFV的潜伏期为4-5日。
  ASFV感染猪的末梢血液中的白细胞数和血小板显著减少,血液不易凝固为特征。解剖时可见血液不凝固,这也是诊断ASFV感染的重要线索。
文章来源:信得科技     文章编辑:一米优讯     
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